Упрощенная HTML-версия
антигенных вариантов вируса КЭ недоступны, целесообразно про
вести изучение диагностических характеристик нескольких серий
ИФТН в сравнении с классическим методом биопроб на чувстви
тельных объектах (например, новорожденных белых мышах или
культуре клеток). В дальнейшем нужно использовать только ис
пытанные серии тест-наборов, так как разные серии одного и того
же производителя могут отличаться по методикам подготовки ре
активов и протоколам реакции. Это обстоятельство объясняют по
стоянным совершенствованием ИФА [148]. Вместе с тем малейшие
нарушения протокола ИФА могут существенно снизить выявляе-
мость слабоположительных образцов, т.е. привести к ложноотри
цательным результатам.
В наших исследованиях экспресс-индикацию антигена виру
са КЭ в отдельных особях клещей проводили прямым твердофаз
ным вариантом ИФА с использованием экспериментальных серий
тест-систем, приготовленных в лаборатории биологии и индика
ции арбовирусов Института вирусологии им. Д.И.Ивановского
РАМН, на основе мышиных антител к штамму 4072 вируса КЭ
[129]. Результат ИФА учитывали визуально или фотометрически
на приборах «Унискан» или «Мультискан» (Flow) при длине волны
492 нм. При визуальном учете интенсивность окрашивания суб-
стратно-индикаторного раствора оценивали по 4-балльной шкале, а
при инструментальном учете - отношением оптической плотности
(ОП) исследуемой пробы к ОП отрицательного контроля (величина
P/N). Положительными считали пробы с отношением P/N более
2,1 [358, 406]. Титрование вируса КЭ в отдельных особях членис
тоногих, снятых с людей и собранных с растительности, проводили
в культуре клеток СПЭВ, выращенных в 96-луночных планшетах.
Количество инфекционного вируса в отдельном клеще выражали
десятичным логарифмом 50% культуральных инфицирующих доз
(lg КИД50). Техника выполнения вирусологических исследований
подробно описана в Методических рекомендациях ГСЭУ М3 СССР
«Вирусологическое исследование отдельных экземпляров иксодо-
вых клещей с использованием методов микроанализа», разработан
ных при непосредственном участии автора [35].
Нами были испытаны три экспериментальные серии тест-набо-
ров. Две из них (№ 1 и № 2) позволяли выявлять АГ вируса КЭ
68