Упрощенная HTML-версия
35
воск. Срезы толщиной 5 мкм и 7-10 мкм изготовляли на ротационном
микротоме, окрашивали гематоксилином Майера и эозином, азур II – эозином
по Нохт-Максимову (Лилли Р., 1969; Меркулов Г.А., 1969).
Иммуногистохимическое исследование выполняли на парафиновых срезах
с применением стрептовидин-биотинового метода (“Dako”, Дания, LSAB2
Systems, HRP). Демаскировку антигена проводили на цитратном буфере
(рН=6,0), в бытовой СВЧ-печи. Исследование проводилось под руководством
Глатко
С.Б.,
заведующего
патологоанатомическим
отделением
государственного учреждения здравоохранения Омской области «Клинический
онкологический диспансер». Популяции лимфоцитов определяли с помощью
моноклональных антител к CD – рецепторам (CD3, CD20). Для иммунного
окрашивания использовали авидин-биотиновый пероксидазный метод
(Novostain Universal Quick Kit (NCL – RTU – Qu), UK). В качестве хромогена
применяли диаминбензидин, ядра докрашивали гематоксилином (Цыплаков
Д.Е., Петров С.В., 1997; Петров С.В., Райхлин Н.Т., 2000).
Для изучения структурной организации стенки подвздошной кишки
производили поперечный срез через все слои стенки, для изучения пейеровой
бляшки – продольные. С целью лучшей визуализации всех структур
лимфатического узла использовали продольные срезы, проходящие через
ворота органа.
С помощью окулярной сетки при увеличении в 32 раза под микроскопом
МБС–10 определяли площади основных структурных компонентов органов.
Подсчитывали количество пересечений сетки, приходящееся на интересующий
компонент (Глаголев А.А., 1941; Автандилов Г.Г., Яблучанский Н.И., Губенко
Н.И., 1981). При выборе увеличения тестовой системы выполняли основное
условие: на любую из оцениваемых структур попадала как минимум одна точка
(Христолюбова Н.Б., Мельников В.А., Шилов А.Г., 1974).
Общую площадь среза (А
i
) рассчитывали следующим образом:
A
i
= A
m
+A
k
+A
c
+A
n
+A
x
, где m, k, c, n – исследуемые компоненты, x – все
остальные точки.