Стр. 72 - 2

70
Приготовление реакционной смеси производилось следующим образом: в
пробирки вносилось по 5 мкл образца ДНК; 18,5 мкл раствора 1; 1,5 мкл Taq-
полимеразы. Всего 25 мкл. Далее в пробирки добавлялось по 5 мкл
контрольного ДНК (положительный контроль при наличии гетерозиготного
носительства) и 5 мкл деионизированной воды (отрицательный контроль на
отсутствие амплификации). После добавления фермента, которое
производилось в последнюю очередь, смесь тщательно перемешивалась. Если
амплификатор не имел нагреваемой крышки, в пробирки добавлялось по одной
капле минерального масла. Далее пробирки переносились в амплификатор и
проводилась амплификация по следующей программе:
95ºС – 30 сек
65ºС – 30 сек 31 цикл
72ºС – 30 сек
Анализ результатов диагностики проводился следующим образом: в случае
положительного контроля выявлялись полосы размером 225, 142 и 83 п.о.; при
наличии гомозиготного варианта С/С выявлялись полосы размером 142 и 83
п.о.; в случае определения гетерозиготного варианта С/Т наблюдались полосы
размером 225, 142 и 83 п.о. При идентификации гомозиготного варианта Т/Т
выявлялась полоса размером 225 п.о. На рис. 7 показан пример анализа
результата выявления полиморфного региона гена CD14 (–260) C→Т.